低速離心機在提取細胞質(zhì)和細胞核蛋白中的應用

  蜀科低速離心機操作簡(jiǎn)單、運行平衡、性能穩定、安全可靠，入選“國產(chǎn)好儀器”，在，放射免疫、生物化學(xué)、食品衛生、環(huán)保等科研領(lǐng)域都有廣泛應用。今天來(lái)介紹一下低速離心機在提取細胞質(zhì)和細胞核蛋白中的應用。

  提取細胞質(zhì)和細胞核蛋白的操作步驟如下：

　　1、決定細胞生長(cháng)狀態(tài)，細胞生長(cháng)狀態(tài)應該是80%或者更好：
　　2、用蜀科離心機以1500r/min離心5min
　　3、棄上清液，用等體積的冷PBS洗細胞，像步驟2那樣，反復3次
　　4、根據估計的沉淀量加入5倍體積的isotonic lysis buffer到細胞顆粒中，使細胞溫和懸浮，盡量避免泡沫
　　5、加入裂解液lysis buffer在懸浮的細胞中，并放在冰上15min讓細胞膨脹，可以通過(guò)顯微鏡檢查
　　6、對于細胞實(shí)驗中膨脹的細胞，加入10%的IGEPAL CA-630使后的濃度達到0、3%，混勻，加的時(shí)候要溫和
　　7、立即用蜀科低速離心機離心（量大的可以用1、5ml的 EP管，以5500r/min離心30s；量大的可以用50ml的管子以5500r/min離心2min）
　　8、轉移上清液（細胞質(zhì)蛋白）到一個(gè)新的冷凍管中
　　9、用懸浮顆粒5倍體積的isotonic lysis buffer懸浮細胞，并混勻。
　　10、用離心機離心細胞懸浮液，以1500r/min離心5min，移掉上清液
　　11、用2/3倍體積的extraction buffer懸浮顆粒
　　12、把管子放置在震蕩混勻器上，以700r/min，15min震蕩混勻，接著(zhù)以1400r/min,15min,整個(gè)過(guò)程要仔細，避免泡沫產(chǎn)生
　　13、以9400r/min離心15min，低溫離心完后轉移上清液到一個(gè)新的冷凍離心管中
　　14、分成幾份用液氮冷凍，并且保存起來(lái)（長(cháng)期保存應放在-80℃上，短期保存要放在-20℃上）。
  蜀科儀器專(zhuān)注于離心機的研發(fā)、生產(chǎn)、銷(xiāo)售，產(chǎn)品遠銷(xiāo)海內外，低速離心機各項指標更是處于行業(yè)優(yōu)勢地位，還可提供定制服務(wù)，咨詢(xún)。